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近日，山東大學齊魯第二醫(yī)院靳斌教授團隊與李景新教授團隊在歐洲肝臟研究學會（EASL）的官方旗艦期刊Journal of Hepatology（中科院1區(qū)TOP期刊，IF：33）在線發(fā)表了最新研究成果《Restoration of N-glycosylation via leucine-activated leucyl-tRNA synthetase 1 overcomes chemoresistance in intrahepatic cholangiocarcinoma》。
文章解讀
研究成果
肝內膽管癌（ICC）是一種高度致死的肝惡性腫瘤，對化療反應率較低。雖然翻譯重編程已被認為是治療抵抗的典型特征，但其在ICC中的作用尚不清楚。
該研究闡明了亮氨酸驅動的亮氨酰-tRNA合成酶1（leucyl-tRNA synthetase 1，LARS1）通過選擇性翻譯上調N-糖基化水平，增敏肝內膽管癌化療療效的機制，為改善ICC化療抵抗提出治療新策略。
模式機理圖
研究方法
該項研究中使用潔特生物一次性PCR管進行RT-qPCR實驗，RT-qPCR實驗用于檢測LARS1、ALG3、RFT1、ALG12等基因的mRNA表達水平，是驗證基因表達變化的關鍵技術之一。
結果表明，亮氨酰-tRNA合成酶1（LARS1）在ICC中顯著下調，尤其在晚期腫瘤中，且與患者生存率呈正相關。通過多種ICC模型，發(fā)現LARS1在調控ICC化學治療抵抗中起關鍵作用。
驗證1
與相鄰的腫瘤周圍樣本相比，LARS1在mRNA和蛋白質水平上顯示出明顯的腫瘤組織減少。此外，低LARS1表達與患者生存率降低顯著相關。
驗證2
相關的補充圖S3B和S3C中，研究者使用RT-qPCR檢測了化療藥物處理對LARS1 mRNA表達的影響。有趣的是，盡管化療藥物導致LARS1蛋白水平下降，但其mRNA水平反而上升了，這表明LARS1的調控發(fā)生在轉錄后水平
驗證3
RNC-qPCR 和多聚核糖體分析表明：LARS1 基因敲低并未改變這些基因的總 mRNA 水平，但顯著降低了其轉錄速率，并且使轉錄本從多聚核糖體組轉移到單聚核糖體組。相比之下，野生型 LARS1 的過表達（而非催化活性缺失型）導致轉錄速率升高，并增加了多聚核糖體組的比例，這證實了 LARS1 的酶活性能夠增強這些 mRNA 的翻譯效率。
驗證4
亮氨酸處理（1.6 mM）時間依賴性地上調 LARS1 mRNA 和蛋白水平（圖8A,B；補充圖 S12A）
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一次性PCR管
潔特生物一次性PCR管優(yōu)選符合USP Class VI標準聚丙烯（PP）原料制成，作為PCR擴增反應體系的承載物時可適應反復高低溫設定，對于低、中通量的PCR/qPCR實驗，一次性PCR管是理想的選擇。
規(guī)格：8聯管 單管
顏色：透明 白色
材質：聚丙烯（PP），符合USP Class VI標準
質量保障：無人源DNA，無RNase/DNase，無熱原，無PCR抑制劑，無ATP
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